打破！免疫层析中的 “ 硬伤 ” CV
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对于层析CV，有网友这样回答：“我做过胶体金的定量产品！确实精密度很难控制，感觉能控制在15%以内就很不错了，是个难题啊 ”
我看了一遍Clin Chem的文献，评价的是ABBOTT 和Biosite的NGAL的产品，Biosite这么牛X的公司，该产品的低值和中值精密性大都在15%左右……！国内有公司号称能做到10%以内，更有甚者说能做到5%……，我在想，改善层析产品的精密度除了尽量保证组分干燥的均一性，保证释放的均一性之外还有什么好的方法吗？我的思维有些固化，小伙伴们有什么好的方向，一起聊聊呗！
就以胶体金而言，制作出来的不同批次胶体金颜色本身就会有一定差异。胶体金截留在T线位置时，实际上不止我们表面看见的。NC膜实际是有厚度的，我们在用机器把蛋白划到NC膜上时，溶液在NC膜上扩散不止是横向扩散还会纵向扩散，当层析的时候有大部分胶体金也会被截留在NC膜的表面以下。而我们机器读数往往只是读的表面灰度。
再说说机器的问题。我们现在市面上的胶体金读数仪原理都是扫描或照相，通过灰度读峰值或面积。其实机器本来就会有差异，如果放卡壳的地方漏光，那么读书偏差会更大。这种差点的机器读数同一个试纸可能都能达到5-10%的误差。
同时我们的样品比如血液或者尿液本来个体之间颜色就会存在较大差异，在NC膜的表现上就是背景颜色有较大的差异，为读数准确带来更大的难题。还有胶体金也可能有部分在NC膜上的残留这样也会导致误差的产生。
再比如金垫、样品垫的位置差异，NC膜贴的位置差异、CT线位置差异、金量差异、时间差异。要想把总CV控制在15%以内都是做的比较理想状态的了，实际上很难达到。
还有一下情况会影响精密度： 抗原抗体性能： 抗体和抗原的质量直接影响检测结果的准确性。如果抗体或抗原纯度不高，亲和力差或者稳定性差，可能会导致CV值偏高。 标记物在结合垫上的分布： 结合垫在免疫层析中用于装载标记物，确保标记物分布均匀对于检测结果的精密度至关重要。以下是一些方法，可以帮助结合垫上标记物分布均匀： 1）选择合适的结合垫：不同类型的结合垫有不同的特性，如吸附能力、孔径大小等。选择适合您的实验要求和标记物特性的结合垫可以提高标记物的分布均匀性。 2）标记物浓度控制：控制标记物溶液的浓度是保证其在结合垫上均匀分布的关键。通常情况下，需要将标记物浓度调整到适当的水平，以确保其能够充分覆盖结合垫而不形成聚集或沉淀。 3）标记物添加方式：标记物可以通过点样或喷雾的方式添加到结合垫上。通过优化这些方法，可以改善标记物在结合垫上的分布均匀性。 4）温度和湿度控制：环境条件对标记物在结合垫上的分布也有影响。保持实验室内的温度和湿度稳定，可以减少由于环境变化导致的标记物分布不均。 5）平稳加载标记物：在将标记物溶液添加到结合垫上时，应尽量保持操作平稳，避免剧烈摇晃或快速移动，这有助于防止标记物在结合垫上形成局部浓度过高的区域。 6）静置时间：在添加标记物后，让结合垫静置一段时间（例如，10-30分钟），以便标记物能够在结合垫上均匀分布。最后进行干燥处理。 包被液均NC膜上的分布： 1）选择合适的包被液：使用适合您的实验需求和NC膜特性的包被液。不同的包被液可能具有不同的吸附能力、稳定性等特性，因此选择合适的包被液对均匀结合至关重要。 2） 调整包被液浓度：适当调整包被液的浓度可以影响其在NC膜上的结合效果。浓度过高可能导致局部过饱和，而浓度过低则可能导致结合不足。通过实验优化包被液的浓度，以达到最佳结合效果。 3）确保NC膜清洁干燥：在进行包被前，确保NC膜表面干净且无灰尘或油脂，并保持适度干燥。这有助于提高包被液与NC膜的结合效率。 4）包被方式：可以选择浸渍法、喷雾法或刷涂法等方法进行包被。通过优化这些方法，可以改善包被液在NC膜上的分布均匀性。 5）温度和湿度控制：环境条件对包被过程有重要影响。保持实验室内的温度和湿度稳定，可以帮助包被液在NC膜上更均匀地分布。
样本垫处理液均匀分布： 适当调整处理液的浓度可以影响其在样本垫上的分布效果。浓度过高可能导致局部过饱和，而浓度过低则可能导致分布不足。通过实验优化处理液的浓度，以达到最佳分布效果。在进行处理前，确保样本垫表面干净且无灰尘或油脂，并保持适度干燥。这有助于提高处理液与样本垫的结合效率。可以选择浸渍法、喷雾法或刷涂法等方法进行处理。通过优化这些方法，可以改善处理液在样本垫上的分布均匀性。环境条件对处理过程有重要影响。
通过上述措施，可以有效地改善免疫层析中的精密度。 |
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