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免疫组化和Western blot一抗二抗不匹配？这些技巧帮你避免实验失误！

2024-1-31 16:54:48

大家好，我是小曼，选择适合的一抗和二抗对于免疫组化或 Western blot 等实验的成功非常重要。以下是一些挑选一抗和二抗的建议和经验总结：

一抗的选择：
特异性：确保一抗针对你感兴趣的目标蛋白具有高度特异性。查看抗体的产品说明书或数据表，了解其特异性和交叉反应性。
种属来源：选择与你的实验样本种属相匹配的一抗。例如一抗是兔抗，那么对应二抗应该是抗兔，可以是羊抗兔，也可以是鼠抗兔，比较拗口，即一抗的种属决定二抗的反应性；
抗体类型：根据你的实验需求选择合适的抗体类型，如多克隆抗体或单克隆抗体。单克隆抗体通常具有更高的特异性，但多克隆抗体可能对多种表位有反应。
应用验证：查看抗体是否已在类似的实验体系或样本中得到验证。参考已发表的文献或抗体供应商提供的验证数据。
品牌和质量：选择信誉良好的抗体供应商，并考虑抗体的质量和批次间的一致性。

二抗的选择：
一抗种属：选择与你使用的一抗种属相匹配的二抗。例如，如果你使用的是兔源的一抗，应选择抗兔二抗。
标记类型：根据你的实验需求选择合适的标记类型，如荧光染料、HRP 等。
特异性：确保二抗对一抗具有高度特异性，以减少非特异性结合。
抗体类型：与一抗类似，选择单克隆或多克隆二抗取决于你的实验要求和特异性需求。

以下是一些挑选一抗和二抗的经验总结：
参考文献和同行经验：查阅相关文献，了解其他人在类似实验中使用的一抗和二抗，并参考他们的经验和建议。
抗体供应商的选择：选择知名和可靠的抗体供应商，他们通常会提供更多的产品信息和技术支持。
预试验：在正式实验之前，可以进行小规模的试验来测试不同抗体的效果，以找到最适合的一抗和二抗组合。
注意质量和批次间的一致性：确保购买的抗体质量可靠，并尽量选择同一批次的抗体以减少实验结果的变异。

注意有的一抗不需要再加二抗处理，因为它们本身耦合有一定激发波长的荧光染料，染色第二天就不需要特殊处理了。2天内拍摄避光，不需要加抗淬灭剂，仅仅需要少量PBS保湿以及4℃避光保存。否则需要加含抗淬灭剂的荧光封片剂封片。

总之，挑选一抗和二抗需要综合考虑特异性、种属来源、抗体类型、应用验证等因素。通过仔细选择和试验，你可以找到最适合你实验的抗体组合，提高实验结果的准确性和可靠性。

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