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肿瘤细胞适用胎牛血清NoverseNFBS-2500A
适合用于常规细胞原代细胞以及干细胞的培养 肿瘤细胞适用胎牛血清NoverseNFBS-2500A 细胞介绍 该细胞对乳汁珠和激活的红细胞有吞噬作用，无表面和胞质免疫球蛋白。可以用佛波醇 TPA诱导单核细胞分化。
细胞特性
细胞培养步骤
【细胞货号】 C5003 【细胞缩写】 RAW 264.7细胞 【细胞名称】 RAW 264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞) 【背景资料】 此细胞株源自Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤。 sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原阴性。此细胞株不分泌可检测到的病毒颗粒，XC斑点形成试验阴性。 可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖。 可以抗体依赖性地分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。 LPS或PPD处理2天可诱导分解红血球但对肿瘤靶细胞无作用。 【组织来源】 Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤；单核细胞；巨噬细胞 【细胞形态】 不规则圆形 【细胞特性】 贴壁 【细胞活力】 95％（Viability by Trypan Blue Exclusion） 【细胞检测】 细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌 【培养条件】 详见细胞说明书 【传代方法】 建议1:2-1:3 两天换液一次 【冻存条件】 详见细胞说明书 【主要文献】 请具体查阅相关发表文章 血清中包含絮状沉淀，它们是什么，怎么处理? 沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性，不会影响产品性质。要除去沉淀，离心血清(400g，1-2分钟)或者简单的让其沉淀在瓶子底部，将血清小心的转移到另一个无菌瓶里(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀，因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以，使用产品时要摇动并加热血清至37℃，沉淀会自然消失。
如何避免血清中产生沉淀? 按如下操作可避免沉淀的产生： (1)解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。 (2) 血清分装冻存时，须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一。 (3) 勿直接由-20℃直接至37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。 (4) 勿将血清置于37℃太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，从而影响血清的品质。 (5) 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。 (6) 若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。 培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗? 一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。 为什么要热灭活血清? 加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学 研究，培养ES细胞、平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。 有必要做热灭活吗? 实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物 的分裂扩增。 若非必须，可以不需要做热处理这一步。不但节省时间，更确保血清的质量! 细胞培养 中出现黑点是污染吗?如何处理? 一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成，首先，要肉眼观察培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。 如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关： (1)细胞生长过老，破碎的细胞残骸; (2)血清质量不好，反复冻融的结果; (3)配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长; (4)配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点; (5)培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。 细胞培养中如何防止黑点生成? (1) 尽可能地减少血清冻融次数。 (2) 培养基无需37℃水浴。 (3) 培养基保持PH值7.0- 7.2。 (4) 严格控制配制培养基的水质，容器定期刷洗。 (5) 掌握细胞传代的时机，细胞切勿生长过老。
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适合用于常规细胞原代细胞的培养
血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的
牛血清是细胞培养中用量zui大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，常用于动物细胞的体外培养，具有极为重要的功能。 1.提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。 2. 提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。 3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。 4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。 5.起酸碱度缓冲液作用。 6.提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。 1、如发现血清浑浊，不透明，含许多沉淀物，说明血清污染或血清中的蛋白质变性，若棕红色，说明血清中的血红蛋白含量太高，有溶血现象。 2、总蛋白含量 胎牛血清一般范围是30-40mg/ml，数值偏高，说明采血的牛龄偏大，不是胎牛，数值偏低，表明血清可能掺水了。 3、血红蛋白 标准为不高于20mg/dl，颜色越红，数值越高，反之，数值越低。 4、pH 国产血清，大多高于7.5，进口胎牛血清，大多低于7.5，具体原因未知，可能和牛龄有关，这也能用来初步鉴别血清的来源。 5、微生物 包括细菌、霉菌、支原体、噬菌体、各类病原性病毒等。随着国内血清厂家生产条件的改善提高，细菌、霉菌等“大型”微生物几乎能100%控制，支原体经过0.1um过滤，大多也能清除。大肠杆菌噬菌体的污染还是比较严重的，主要是生产环境过程中带入，又无法过滤，很难彻底清除，但对血清质量影响不大。病原性病毒，特别是BVDV，在国产血清中几乎90%以上都存在，这类微生物是影响国产血清质量的重要因素之一，而进口胎牛血清中基本都控制的很好。 6. 免疫球蛋白 国产血清的只是定性检测，结果也很不准确，进口胎牛血清大多定量检测。免疫球蛋白的数值能完全体现出采血的时的牛龄情况，国产血清，基本都是新生牛的，血清中容易产生IgM，IgG的含量也偏高，进口胎牛血清，不含IgM，IgG的含量也较低。 不管是国产还是进口血清，都是不测抗生素的（无四环素胎牛血清除外）。国外，抗生素的使用很严格，用量也很少，每头奶牛的产品包括血清都可以溯源的，因此可以做到胎牛血清中不含抗生素或含量极低;国内，抗生素的滥用已成了普遍现象，国产血清中残留很高，对细胞培养极为不利，这是国产血清质量差的根本原因。 |
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