描述说明：Sequenase™ Version 2.0 DNA Polymerase 是一种基因工程形式的 T7 DNA 聚合酶。与野生型酶不同，它几乎没有 3'→5' 核酸外切酶活性。Sequenase Version 2.0 具有高度持续性，包含核苷类似物（dlTP、硫代-dNTP、二脱氧-RNA 等），不会受阻于二级结构，并可进行链置换合成。该酶可出色用于双脱氧测序，在其他应用中也很有帮助，尤其适合不希望存在相关核酸外切酶活性的情况。Sequenase Version 2.0 有两个亚单位，一个是大肠杆菌硫氧还蛋白（分子量 12,000），另一个是转基因形式的噬菌体 T7 基因 5 蛋白（分子量 76,000）。该亚单位发生的基因改变（通过体外诱变敲除氨基酸 28）清除了所有可测量的核酸外切酶活性，但不会改变 DNA 聚合酶的活性。 View Hi-Res PDF Version Properties: 分子量：由两个亚单位组成：经过修饰的 T7 基因 5 蛋白 (76 kDa) 和大肠杆菌 硫氧还蛋白 (12 kDa) 最佳 pH：7.5 最佳温度：37°C 二价阳离子要求：Mg2+、Mn2+ 纯度： 采用 SDS-PAGE 测得的纯度超过 95%。已针对是否受到双链及单链核酸内切酶和核酸外切酶污染进行过检测。 Storage Buffer: 20mM potassium phosphate (pH 7.4), 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 50% glycerol. Assay Conditions: 反应混合物 (100 µL) 包含：40mM Tris-HCl (pH 7.5)、10mM MgCl2、5mM DTT、0.3mM dNTP 和 5 µg M13mp18 预退火 5 pmol M13 通用引物。酶加入至预热 (37 °C) 反应混合物中；在 37 °C 下孵育 1 分钟。 单位定义： 一个酶单位可在 37 °C 孵育 30 秒的条件下，催化 1 nmol 核苷酸转变为不溶于酸的形式。 浓度： 13 units/µL Functional Test: 采用 Sequenase Version 2.0 DNA Sequencing Kit (PN 70770) 进行 DNA 测序。 Functionally Tested 5X Sequenase Reaction Buffer (1 ml included, PN 70702): 200mM Tris-HCl (pH 7.5), 100mM MgCl2, 250mM NaCl Sequenase Dilution Buffer (1 ml included, PN 70765): 10mM Tris-HCl (pH 7.5), 5mM DTT, 0.1mM EDTA. References: Tabor, S. and Richardson, C. C. (1989) J. Biol.Chem.264, 6447-6458. Wang, D., Coscoy, L., Zylberberg, M., Avila, P. C., Boushey, H. A., Ganem, D. and DeRisi, J. L. (2002) Proc Natl.Acad.Sci.USA, 99, 15687-15692. Paris, M. (1992) Comments 18, (No. 3), United States Biochemical Corporation, Cleveland, Ohio. Tabor, S. and Richardson, C. C. (1987) Proc.Natl.Acad Sci.USA 84, 4767-4771. Tabor, S. and Richardson, C. C. (1989) Proc.Natl.Acad.Sci. USA 86, 4076-4080. |
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