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【产品名称】NK细胞高效扩增试剂盒
【产品组成】试剂盒套装货号：661070
【1. 产品介绍】 Ø 本产品是一款NK细胞高效扩增的试剂盒。。外周血/脐带血中的PBMC/CBMC细胞经本试剂盒处理后，在14-16天时间内，2L体系细胞总数可达到6×109-8×109，细胞存活率90%以上，NK细胞比例最高可达90%以上。 Ø 本试剂盒适用于人外周血/脐带血和经过血细胞单采仪处理获得的白细胞等来源的样品。 Ø 本试剂盒是在符合相关规范的无菌环境中生产，并已通过了严格的细菌、真菌、支原体、病毒（HIV、HAV、HBV、HCV）、内毒素检测。本试剂盒不含血浆、动物源成分以及其他不明确成分。 【2. 用户需要自行准备的试剂耗材】 0.4%苔盼蓝、生理盐水、人淋巴细胞分离液、肝素钠（锂）采血管或100ml采血袋、PBS、75cm2悬浮培养瓶、175cm2培养瓶、细胞培养袋、15ml/50ml/250ml离心管、移液管、5ml和50ml无菌注射器等。 【3. 样本采集及运输要求】
3.1、外周血样本采集应为肝素钠采血管，脐带血优先选择100ml采血袋，采集过程应严格规范无菌。实际采血总量应大于50ml，采集后血液与抗凝剂应及时混匀。
【4. T75培养瓶包被】
【5. PBMC的分离和血浆制备（以50ml样本THERMO ST16离心机为例）】 6.1 第一瓶培养基｛NK Cell Culture Medium (661071)｝加入一支NK-E (661076)，充分混匀，配置成完全培养基，使用前恢复至室温； 6.2 第二瓶培养基｛NK Cell Culture Medium (661071)｝加入一支NK-F (661077)，充分混匀，配置成完全培养基，使用前恢复至室温； 6.3 按顺序配置使用 【7. 细胞接种】 7.1 取包被瓶，去包被液待用； 7.2 取45ml完全培养基，加入一支NK-B和5ml自体血浆混匀； 7.3 用混匀后的完全培养基重悬已经收集好的单个核细胞；调整细胞密度1.5-2.0×106cell/ml；（如初始细胞总数较少，按比例降低接种细胞体积,初始细胞总数不超过1×108cell/ml） 7.4 D0（指接种当天）转移混匀后的细胞悬液至包被瓶，转移过程中不可快速冲刷T-75培养瓶处理面，应从侧面缓慢加入后，再缓慢平放于培养箱中培养。 【8. 补液】 8.1 D3，镜下观察有较多克隆团出现，即可补液，如有大量较大的克隆团，可适当打散（下同）， 转移细胞至T175培养瓶中，补加45ml完全培养基，一支NK-C和5ml自体血浆混匀； 8.2 D5，补加110ml完全培养基，加入一支NK-D和10ml自体血浆，混匀； 8.3 D7，补加200ml完全培养基和10ml自体血浆，混匀，转入细胞培养袋； 8.4 D9，分袋，先将培养袋中细胞取一半均分到新的细胞培养袋中， 然后将400ml完全培养基和10ml自体血浆，混匀，均分到2个培养袋中；自体血浆如用完可不添加或用细胞营养添加物替代（下同）； 8.5 D11，往细胞培养袋中分别补加300ml完全培养基和5ml自体血浆，混匀； 8.6 D13，往细胞培养袋中分别补加300ml完全培养基5ml自体血浆，混匀； 8.7 如需扩大培养体系（如3L、4L、6L、8L），使用 NK-F 因子配置的完全培养基继续补液培养即可； 8.8 整体根据细胞密度适当补液，补液后细胞密度不低于1.5×106cell/ml。 【9. 收获】 收获NK细胞，可根据实验情况，适当提前或延迟。 |
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